可視化Transwell細胞趨化實(shí)驗前的攻略指南

　　細胞的趨化性被描述為細胞向趨化劑的定向遷移；趨化作用是無(wú)向的細胞遷移，在細胞經(jīng)歷趨化作用時(shí)，它們會(huì )因某種物質(zhì)而改變細胞的遷移速度但不會(huì )改變其遷移方向。

　　開(kāi)始實(shí)驗前需要確認的問(wèn)題：為了正確設置趨化性測定，需要先確認以下幾個(gè)重要問(wèn)題。

　　1.您打算研究哪種細胞類(lèi)型？

　　了解您感興趣的細胞類(lèi)型--包括培養基要求和遷移速度--對于后續的檢測計劃至關(guān)重要。

　　2.所分析的細胞類(lèi)型的遷移速度是多少？

　　雖然有些細胞遷移速度較慢(如腫瘤細胞或成纖維細胞)，但其他類(lèi)型的細胞(如白細胞)遷移速度非?？?。細胞遷移速度將決定實(shí)驗的持續時(shí)間和圖像之間所需的間隔。此外，梯度穩定性必須足夠高，以適應實(shí)驗的總持續時(shí)間。ibidi µ -Slide Chemotaxis 細胞趨化載玻片適用于慢速和快速遷移細胞的趨化性分析。

　　3.培養基是什么？

　　大多數細胞類(lèi)型在含有胎牛血清(FCS)的培養基中培養，但它卻含有許多可以影響細胞遷移的因素，因此可能會(huì )改變趨化性測定的結果。例如，趨化劑對細胞遷移的影響可以被FCS誘導的影響所掩蓋。在開(kāi)始測定之前逐漸降低培養基中的FCS濃度是克服這個(gè)問(wèn)題的一種方法。此外，還開(kāi)發(fā)了不含FCS的特殊無(wú)血清培養基。在開(kāi)始測定之前，必須測試每種感興趣細胞類(lèi)型的最佳培養基成分。

　　4.感興趣的細胞類(lèi)型的最佳接種密度是多少？

　　接種密度取決于許多細胞因素，例如增殖速率、行為、形狀、上皮或間充質(zhì)狀態(tài)以及對細胞與細胞接觸的依賴(lài)性。此外，在確定最佳細胞接種密度時(shí)必須考慮實(shí)驗持續時(shí)間。為了有足夠的可追蹤細胞，開(kāi)始實(shí)驗時(shí)密度不能太低。在實(shí)驗結束時(shí)，單細胞應該是清晰可定義和可追蹤的?？紤]到這些因素，在開(kāi)始趨化性測定之前，應分別確定每種細胞類(lèi)型的最佳接種密度。

　　5.應該進(jìn)行多少次實(shí)驗？

　　通常，三到五次重復實(shí)驗足以從趨化組和相應的對照組創(chuàng )建重要數據。每個(gè)實(shí)驗應包含20-40個(gè)單細胞的跟蹤數據，這可以使用低放大倍率顯微鏡物鏡（例如5倍或10倍）來(lái)實(shí)現。

　　6.應該進(jìn)行2D或3D趨化性分析嗎？

　　大多數細胞自然嵌入3D矩陣中。在趨化性測定過(guò)程中在2D環(huán)境中培養它們可能會(huì )改變它們的行為和遷移能力。為了克服這個(gè)問(wèn)題，可以將細胞嵌入模仿其自然環(huán)境的3D基質(zhì)中，例如膠原蛋白、基質(zhì)膠或其他水凝膠。而細胞趨化載玻片非常適合2D和3D實(shí)驗。

　　7.實(shí)驗中必須包括哪些對照？

　　為了正確分析趨化性實(shí)驗，至關(guān)重要的是包括不含任何趨化劑的陰性對照 (-/-)，以及整個(gè)室中含有趨化劑的陽(yáng)性對照 (+/+)。

　　在使用細胞趨化載玻片時(shí)，由于梯度以外的所有條件都是對稱(chēng)的，因此需要較少的控制測量。這允許相互獨立地分析趨化性和趨化運動(dòng)。在該實(shí)例中，趨化劑誘導癌細胞的趨化性和趨化運動(dòng)。