分光光度計的使用技巧

分光光度計是生物學(xué)實(shí)驗室*的好伙伴。它常用來(lái)測定生物樣品中的核酸、蛋白和細胞。這些樣品要么體積有限，要么濃度很高，為分光光度法測定帶來(lái)了一定挑戰。當然，技術(shù)在不斷發(fā)展，讓微量樣品的測定成為現實(shí)。在分光光度計的使用過(guò)程中，有哪些需要注意的呢？讓拓赫來(lái)告訴你。

據介紹，分光光度計使用過(guò)程中的大問(wèn)題往往在于用戶(hù)選擇了錯誤的方法或錯誤的比色皿。而另一個(gè)問(wèn)題在于純化的策略不對。用戶(hù)應正確選擇分光光度計，并注意下面的一些問(wèn)題。
低體積 vs. 低濃度

我們首先要了解樣品的特性。有時(shí)，我們可能會(huì )混淆低體積和低濃度，產(chǎn)生有問(wèn)題的數據。這時(shí)，我們有必要回憶一下比爾-朗伯定律：當一束平行單色光垂直通過(guò)某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時(shí)，其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度c及吸收介質(zhì)的厚度l成正比。根據這一定律，當吸收介質(zhì)厚度不變時(shí)，A與c之間應該成正比。而對于高濃度的樣品，應使用較短的光程長(cháng)度進(jìn)行測定。
樣品純度

樣品純度很重要，這不僅僅關(guān)乎分光光度法測定，也涉及到其他的下游應用。樣品中的雜質(zhì)可能包括蛋白、緩沖液組分，甚至細胞。你應當根據樣品量和濃度來(lái)選擇樣品制備策略。各大廠(chǎng)家都提供選擇指南和操作手冊，教你如何選擇適合的產(chǎn)品。此外，要避免過(guò)濾柱的過(guò)載，以免產(chǎn)生不純的樣品洗脫液。
選擇適當的比色皿

比色皿是光學(xué)透明的容器，裝有分析溶液，將樣品引入光路中。分析波長(cháng)在350 nm以上時(shí)，可選用玻璃或石英比色皿，在350 nm以下時(shí)須使用石英比色皿，當然，現在也有一次性的塑料比色皿。有些比色皿提供不同的光程長(cháng)度，如Eppendorf的UVettes。它提供兩種不同的透光光徑：10 mm和2 mm。通常濃度的樣品可以用10 mm光程長(cháng)度進(jìn)行檢測。對于高濃度的樣品，只需將比色皿旋轉90°，使用稍短的2 mm光徑進(jìn)行檢測。

在使用前一定要仔細檢查比色皿，如果有刮花或油污，或者上面有指紋，都會(huì )導致不準確的測定結果。目前市場(chǎng)上的有些分光光度計很靈活，可以容納多種比色皿，包括微量比色皿。這些微量比色皿使用微量的高濃度樣品，特別適合生物分子（如核酸和蛋白）的測定。有些分光光度計是直接把樣品放在測量窗口上，也十分方便。

軟件要求
沒(méi)人想把時(shí)間花在儀器培訓上。因此，在您選擇分光光度計時(shí)，簡(jiǎn)單易用也是個(gè)重要的考量因素。即拆即用，這當然是美了。數據管理和存儲也應當考慮。在有些情況下，電源中斷或系統故障會(huì )導致數據損失。如今有些儀器能直接連到電腦，而不需要額外的軟件或存儲設備。

隨著(zhù)技術(shù)的發(fā)展，專(zhuān)為生物學(xué)應用而開(kāi)發(fā)的分光光度計在不斷涌現。相信我們的選擇會(huì )越來(lái)越多，而儀器使用也會(huì )越來(lái)越簡(jiǎn)單、方便、靈活